色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。

　　柱效受柱内外因素影响，为使色谱柱达到最佳效率，除柱外死体积要小外，还要有合理的柱结构(尽可能减少填充床以外的死体积)及装填技术。即使好的装填技术，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的，靠近管壁的部位比较疏松，易产生沟流，流速较快，影响冲洗剂的流形，使谱带加宽，这就是管壁效应。这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍粒径的厚度。在一般的液相色谱系统中，柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。

　　色谱柱的使用有哪些小妙招

　　•加装保护柱

　　保护柱属消耗品，经过一定次数的样品分析(50~100次)后，出现柱压显著升高或峰形变坏或基线漂移时，应考虑更换保护柱。

　　•过滤流动相和样品

　　流动相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成，原则上，所有经过色谱柱的流动相均应过滤，但在实际操作上应视具体情况而有所区别 。

　　•净化样品

　　样品中含有对色谱柱有损害的化学成分，如产生吸附的蛋白质、糖等有机分子和强吸附性物质,以及可能对柱填料产生破坏作用的基团离子。在进样前应尽可能对样品进行分离提纯以除去多余杂质组分。

　　•避免过高的柱压

　　(1)柱压过高时，尽可能采用较小的流速，以不超过柱最大允许压力的一半为宜。

　　(2)当流速较大时，应采取流速梯度的办法使流速分步到位。

　　(3)使用手动进样阀时，进样阀的切换要尽可能的快。

　　•注意温度和酸碱度

　　一般以硅胶为基质的色谱柱最高使用温度不超过60℃，以低于40℃为宜，特别是在流动相pH接近使用限度时，更应降低使用温度。目前的键合硅胶色谱柱标示的pH适用范围可达2~10，但在实际使用时应避免特殊的pH条件，特别是在偏碱性的条件(pH≥8)下使用。如必须要在特殊的pH条件下使用时，可通过以下方法避免柱损害：

　　(1)在泵和进样阀之间加装预柱(饱和柱)来饱和流动相；

　　(2)降低使用温度；

　　(3)检验完毕后立即用与所使用的流动相互相混溶的“温和溶剂”*清洗。

　　•正确及时的冲洗

　　始试验前，了解柱中当前是何种溶剂。对于新色谱柱，如无特殊说明均为评价报告中所用流动相。柱中当前溶剂一定要与分析样品所用流动相互溶，如不能混溶，要用与二者均能相互混溶的第三种溶剂过渡。异丙醇是能与各种溶剂混溶的试剂，可作为中介流动相使用。对于含有缓冲盐的流动相，好的办法是先用与分析用流动相组成*相同但不含缓冲盐的溶液进行冲洗，再逐步过渡到纯甲醇冲洗。